河南农业大学学报

2020, v.54;No.220(04) 638-642

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携肠球菌Ace抗原的铁蛋白纳米粒制备与免疫效果检测
Preparation and immunoassay of ferritin nanoparticles carrying antigenic epitopes of Ace from Enterococcus feacalis

和春昊;金钺;张晨昕;郭珍珍;李滨洲;吴秋玲;王亚宾;陈丽颖;

摘要(Abstract):

为制备携肠球菌胶原蛋白黏附素Ace抗原表位的铁蛋白纳米颗粒,并评价其免疫效果,利用生物信息学软件预测Ace抗原表位,合成相应的基因片段,分别构建含有相应抗原表位基因与铁蛋白H亚基基因的融合表达载体,同时构建融合表达Ace蛋白和H亚基的质粒pET-32a-ace-H,分别转入大肠杆菌中进行融合表达。利用Western blot鉴定各重组融合蛋白的反应原性,并利用透射电镜观察目的蛋白表征。用重组铁蛋白纳米颗粒分别制备免疫原进行家兔接种试验,并定期检测家兔血清特异性抗体水平。结果显示,正确构建了6个Ace蛋白抗原表位基因与H亚基基因的融合表达载体pET-32a-ace1-H~pET-32a-ace6-H,其中pET-32a-ace1-H、pET-32a-ace3-H、pET-32a-ace5-H和pET-32a-ace6-H为可溶性表达载体。Western blot检测显示可溶性表达的4种融合蛋白均具有较好的反应原性。透射电镜图像显示,4种融合蛋白均形成了具有中空结构的铁蛋白纳米笼,其直径与天然铁蛋白类似;而融合蛋白Ace-H纳米笼没有中空结构,且直径比天然铁蛋白大。家兔免疫试验结果显示,6种融合蛋白均在家兔体内诱导产生了特异性抗体,而且,携带单个Ace表位的铁蛋白纳米颗粒Ace1-H、Ace3-H、 Ace5-H与携带多表位的Ace重组蛋白以及Ace-H纳米颗粒相比,其诱导的抗体效价和消长规律均一致,其中以铁蛋白纳米粒Ace5-H的免疫效果为最佳。本研究结果表明铁蛋白纳米颗粒能有效增强蛋白质抗原的免疫原性,有望作为候选表位疫苗佐剂得到应用。

关键词(KeyWords): 粪肠球菌;胶原蛋白黏附素;铁蛋白;纳米颗粒;表位疫苗

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 河南省重点科技攻关项目(152102310081)

作者(Author): 和春昊;金钺;张晨昕;郭珍珍;李滨洲;吴秋玲;王亚宾;陈丽颖;

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DOI: 10.16445/j.cnki.1000-2340.2020.04.011

参考文献(References):

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